这些资料能让您更直观的了解植物elisa试剂盒的操作步骤

　　植物ELISA试剂盒是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在植物学检验的各领域中。

 

　　植物ELISA试剂盒实验原理：

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物白介素1α（IL-1α）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物白介素1α（IL-1α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

 

　　植物ELISA试剂盒技术关键：

　　1、细胞上清：前处理有必要把细胞离心去掉，每孔直接加100μl即可。假定浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释；

　　2、脑脊液：前处理有必要把细胞离心去掉，每孔直接加100μl即可。假定浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释；

　　3、血清血浆：请参与50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量参与，缺少部分用标准品稀释液赔偿至100ul；

　　4、组织匀浆液的样本，要制备过程中需要在缓冲液中参与蛋白酶抑制剂，防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解，构成查看效果的值偏低。

 

　　植物ELISA试剂盒的实验操作步骤：

　　1、把试剂混匀，切记实验时不要加理大量含有泡沫的液体，避免实验产生误差。

　　2、跟数据测样决定板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔 加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

　　4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7、每孔加入底物各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。一定要避免光照。

　　8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9、在450nm波长处测定各孔的OD值。