详细解析人ELISA检测试剂盒的实验原理、计算以及标本

　　人ELISA检测试剂盒的检测目的是用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

 

　　实验原理：

　　人ELISA检测试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

 

　　人ELISA检测试剂盒的计算：

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

 

　　兔ELISA试剂盒液体类标本： 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

　　1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　3、尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

　　4、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。