小鼠表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。往预先包被小鼠表皮生长因子(EGF)抗体的包被酶标板孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
小鼠表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒样本处理及要求:
1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4、细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
小鼠表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒标本要求:
1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。