人降钙素(CT)elisa试剂盒是怎么操作的？又该注意哪些事项？

　　人降钙素(CT)elisa试剂盒免疫测定依其测定结果的表达方式，可分为定性和定量两类。定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果；定量测定的结果则以浓度的方式表达。

 

　　定性测定结果确定的依据在于阳性/阴性判定值（cut-off）的建立，cut-off值的确立应尽可能地避免假阳性或假阴性结果的出现。除了cut-off值以外，还有许多其他的设值方法以判断阴性和阳性结果，如S/N（常称为P/N）比值（ratio）等。

 

　　定量测定的依据是使用系列浓度标准品测得的剂量反应曲线（即通常所谓的标准曲线）。由于定量免疫测定中的剂量反应曲线与生化测定中的标准曲线相比，一般均为非线性的，变异较大，故不宜称为标准曲线。

 

　　人降钙素(CT)elisa试剂盒的操作流程：

　　1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

　　3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

　　4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　

　　注意事项：

　　1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂；

　　2、洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉；

　　3、消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值；

　　4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用；

　　5、封板膜只限一次性使用，避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果；

　　6、在储存和温育时避免强光直接照射。底物请避光保存；

　　7、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。